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當前位置:首頁> 產品選擇指南 > microRNA & RNAi研究相關制品 > RNA合成 > Takara IVTpro mRNA Synthesis System
Takara IVTpro mRNA Synthesis System
品牌 Code No. 產品名稱 包裝量 價格(元) 說明書 數量
Takara 6141 Takara IVTpro mRNA Synthesis System 1 Kit ¥4,973
Takara 6143 Cloning Kit for mRNA Template 10 Rxns ¥1,531
Takara 6144 Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit 20 Rxns ¥3,442
 
一款合成高質量、高產量mRNA的體外轉錄(IVT)試劑盒
·通過體外轉錄(IVT)合成帶有Cap結構和Poly(A)序列的mRNA;
·優化的T7 RNA聚合酶用于IVT反應,RNA合成效率高、產量大;
·獨立包裝的NTPs,方便修飾NTPs替換,且不影響mRNA產量;
·采用In-Fusion無縫克隆,輕松構建模板質粒DNA;
·使用氯化鋰(LiCl)溶液進行RNA純化,可立即進行下游應用。
 
■ 制品說明
Takara IVTpro mRNA Synthesis System是能夠簡便、高效合成帶有Cap結構和Poly(A)序列的mRNA的體外轉錄試劑盒。它包含以下兩種制品:
① Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143):
本試劑盒用于將模板DNA無縫克隆到預線性化載體(包含在本試劑盒中)中構建用于體外轉錄反應的模板質粒。預線性化載體中包含T7 啟動子、轉錄起始序列 (AGG)、5'-UTR(非編碼區)、3'-UTR、和105-base Poly(A) 序列。試劑盒還包含用于將目標DNA無縫克隆到預線性化載體的In-Fusion Snap Assembly Master Mix和FLuc對照片段(包括15 bp,3' In-Fusion sequence;FLuc CDS;和15 bp,5' In-Fusion sequence)。
 
② Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144):
本試劑盒以含有 T7 啟動子序列的雙鏈 DNA 為模板,使用優化的高效T7 RNA聚合酶,通過體外轉錄可合成大量mRNA。除此以外,還包含用于IVT反應后消化模板DNA的DNase I和用于純化mRNA的氯化鋰 (LiCl) 溶液。真核細胞翻譯蛋白質需要RNA的5'端有Cap結構,本試劑盒配合使用CleanCap Reagent AG(TriLink公司的Cap類似物)可以高效制備具有Cap結構的mRNA。另外,試劑盒包含單獨的NTPs,方便優化或使用修飾NTPs如假尿苷替換,而且不會明顯降低mRNA的產量。使用本產品,每次反應(20 μl 反應體系)可以合成高達 200μg 或更多的RNA??梢愿鶕枰糯蠓磻w系,即使使用10倍(200μl)反應體系也不影響mRNA預期產量(請參考說明書實驗例)?!鵆ap類似物不包含在本產品中,請另外準備CleanCap Reagent AG (TriLink公司)。
 
 
使用Takara IVTpro 系統合成 mRNA時,通過In-Fusion方法克隆目標基因(GOI)后,使用不會在 Poly (A) 下游留下額外序列的限制性內切酶切割是非常重要的。強烈建議使用 Hind III(Code No. 1060A/B)對用于mRNA合成的質粒進行線性化(請參考說明書和載體圖譜信息)。
 
■ 用途
· 用于體外轉錄(IVT)模板質粒DNA的構建
· 配合使用TriLink公司的CleanCap Reagent AG體外轉錄合成mRNA
· 使用其它Cap類似物如Anti-Reverse Cap Analog (ARCA)合成帶帽結構的mRNA
(* 請注意,使用ARCA時,需要設計與本產品不同的模板序列。)
· 用于長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA)的合成
· 向導RNA(guide RNA)的合成
· siRNA前體的合成
· 用于RT-qPCR的RNA標準模板的合成
· RNA探針的合成
 
■ 制品內容
Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143)(10次反應)
 
產品組分 體積量 件數/Kit
1. Linearized Template Vector (50 ng/μl)  10 μl 1
2. FLuc Control Fragment (100 ng/μl) *1  10 μl 1
3. 5X In-Fusion Snap Assembly Master Mix  20 μl 1
 
*1:由 In-Fusion 序列 (15 bp) + FLuc-CDS + In-Fusion 序列 (15 bp) 組成的對照片段 (1,683 bp)
 
Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144)(20次量、20 μl反應體系)
 
產品組分 體積量 件數/Kit
1. 10X Transcription Buffer  40 μl 1
2. 10X ATP  40 μl 1
3. 10X CTP  40 μl 1
4. 10X GTP  40 μl 1
5. 10X UTP  40 μl 1
6. 10X Enzyme Mix  40 μl 1
7. Nuclease-Free Water  1 ml 3
8. DNase I  80 μl 1
9. Lithium Chloride Precipitation Solution  600 μl 1
10. Positive Control Template (FLuc) (0.5 μg/μl)2  10 μl 1
 
*2:由T7 啟動子 + 5'UTR + FLuc-CDS + 3'UTR + Poly (A) 序列組成的線性質粒DNA。
 
■ 實驗操作注意事項
· 本制品是通過IVT反應合成RNA的試劑。如果雙鏈DNA模板、試劑、試管、微量移液器吸頭或反應中使用的其他材料混入RNase污染,會導致使用本試劑盒獲得的RNA收量降低或片段化。在反應中使用專用試管和微量移液器吸頭,并戴上新的一次性手套以防止RNase污染。
· 10X Enzyme Mix 不要劇烈攪拌。
· 使用前將Lithium Chloride Precipitation Solution在室溫下融化。融解后,如果充分混合后仍可見沉淀,可37℃保溫溶解。如果仍有沉淀物,請直接使用,對性能沒有影響。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 試劑盒以外的其它必要試劑(主要試劑)
· CleanCap Reagent AG(TriLink公司)
· 修飾NTPs
· 限制酶(Hind III等等)
 
■ 序列信息 FLuc Control Fragment
序列信息(fasta格式):點此進行下載
該序列與Positive Control Template(FLuc)中2,685~4,367(1,683 bp)的序列相同。
 
■ 序列信息 Linearized Template Vector
序列信息(fasta格式):點此進行下載
Linearized Template Vector(2,921 bp)
 
 
NeoR/KanR: 53~847
Ori: 1,172~1,760
CMV enhancer: 1,861~2,240
CMV promoter: 2,241~2,444
 
T7 promoter sequence: 2,489~2,505
Transcription start sequence (AGG): 2,506~2,508
5’UTR: 2,509~2,559
Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545~2,559
 
In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560
 
Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560~2,574
3’UTR: 2,560~2,672
Poly(A)105: 2,673~2,777
Restriction enzyme sites for plasmid linearization: 2,776~2,801(Hind III, Xho I, Sal I, Avr II, BamH I)
 
Poly(A) Forward Primer: 2,570~2,589
Poly(A) Reverse Primer: 2,863~2,882
 
<T7啟動子后序列的詳細信息>
 
■ 載體信息 Positive Control Template(FLuc)
序列信息(fasta格式):點此進行下載
 
Positive Control Template(FLuc)(4,574 bp)
 
NeoR/KanR: 193~987
Ori: 1,312~1,900
CMV enhancer: 2,001~2,380
CMV promoter: 2,381~2,584
 
T7 promoter sequence: 2,629~2,645
Transcription Start Sequence (AGG): 2,646~2,648
5’UTR: 2,649~2,699
FLuc CDS: 2,700~4,352
3’UTR: 4,353~4,465
Poly(A)105: 4,466~4,570 (FLuc Control Fragment-derived sequence: 2,685~4,367)
 
Linearized site by Hind III (5' overhangs) : 4,569 (4,573)
 
<T7啟動子后序列的詳細信息>
 
 
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