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產品選擇指南

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當前位置:首頁> 產品選擇指南 > 基因導入(Virus、Vectors) > 重組腺相關病毒(AAV)制品 > AAVpro® Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes)
AAVpro® Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes)
品牌 Code No. 產品名稱 包裝量 價格(元) 說明書 數量
Takara 6676 AAVpro® Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes) 4 preps ¥7,508
Takara 6677 AAVpro® Cell & Sup. Extraction/Concentration Pack Maxi (All Serotypes) 1 Kit ¥4,547
Takara 6678 AAVpro® Purification Pack Maxi (All Serotypes) 4 preps ¥4,067
無標題文檔
 
■ 制品內容
AAVpro Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes) (Code No. 6676)
AAVpro Cell & Sup. Extraction/Concentration Pack Maxi (All Serotypes) 6677
AAVpro Purification Pack Maxi (All Serotypes) 6678
 
AAVpro Cell & Sup. Extraction/Concentration Pack Maxi (All Serotypes)(Code No. 6677)
AAV Extraction Solution C 8 ml
AAV Extraction Solution D 32 ml
AAV Extraction enhancer 80 ml
Concentrating solution*1 115 ml×2
Dissolving solution 50 ml
 
AAVpro Purification Pack Maxi (All Serotypes)(Code No. 6678)
Precipitator*2 5 ml
Precipitator B 2.5 ml
Millex-HV 0.45 μm 4個
Amicon Ultra-15, 100 kDa 4個
Suspension Buffer 60 ml×2
Cryonase Cold-active Nuclease 500 μl
 
*1 Concentrating solution4℃保存時可能會產生沉淀,不影響制品的品質和性能。產生沉淀時, 請于40℃水浴中加熱使其完全溶解后再使用。
*2 Precipitator A低溫保存時可能會產生白色沉淀,不影響制品的品質和性能。產生沉淀時,請于37℃水浴中加熱使其完全溶解后再使用。
 
■ 制品說明
用于同時從包裝細胞和培養上清液中純化AAV病毒
· 適用于各種AAV血清型
· 高純度、高回收率
· 特別的AAV提取方法,不需要凍融或者超聲波破碎等耗時操作
· 無需進行超速離心等繁瑣操作
· 附帶純化AAV病毒所需要的所有Buffer
 
腺相關病毒(AAV)能夠將基因導入至增殖細胞和非增殖細胞中,在非分裂細胞中可以實現長期表達。此外,由于它具有低免疫原性,也適合作為動物個體基因導入(in vivo transduction)工具。當使用AAV進行動物個體基因導入時,使用高純度的病毒粒子是很有必要的,需要去除源自病毒包裝細胞和培養基的雜質。在向培養細胞導入基因時,使用純化后的AAV可以消除雜質所帶來的影響。
 
AAV病毒的純化通常使用氯化銫密度梯度超速離心法或碘克沙醇超速離心法,但這兩種方法不僅需要熟練的操作手法,同時還存在耗時長和回收率低等問題。
 
AAVpro Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes)可在大約7小時內從包裝細胞及其培養上清液中純化AAV病毒,而且適用于各種血清型。該試劑盒中包含特別的AAV病毒提取方法,不需要像凍融法和超聲波破碎法那樣繁瑣的操作。AAVpro Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes)(Code No. 6676)由AAVpro Cell & Sup. Extraction/Concentration Pack Maxi (All Serotypes) (Code No. 6677)和AAVpro Purification Pack Maxi(All Serotypes) (Code No. 6678)組成。本制品包含4次AAV病毒純化所需要的緩沖液和純化柱,每次可以純化5個T225培養瓶收集的包裝細胞和培養上清液中的AAV病毒。
 
■ 保存
AAVpro Cell & Sup. Extraction/Concentration Pack Maxi (All Serotypes)(Code No. 6677)
  Concentrating solution 4℃
  其它組份 室溫
 
AAVpro Purification Pack Maxi (All Serotypes)(Code No. 6678)
  Cryonase Cold-active Nuclease -20℃
  其它組份 室溫
 
■ 實驗例
<1. 純化后AAV純度測定>
使用本制品,從5個T225培養瓶培養的包裝細胞中純化攜帶熒光蛋白質ZsGreen1的各血清型(AAV1、AAV2、AAV5、AAV6)AAV病毒。純化后的AAV病毒使用AAVpro Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2(Code No. 6233)測定病毒滴度,以1× 109 vector genome (vg)/lane上樣進行SDS-PAGE。結果顯示,SDS-PAGE上的主要條帶為AAV衣殼蛋白(VP1、VP2、VP3)。
 
 
2. 純化后AAV載體感染性能評價
使用通過上述實驗例「1. 提取純化后AAV(各種血清型)純度測定」獲得的各種血清型AAV,感染293T細胞和HeLa細胞,評估其感染滴度。純化后的AAV以50,000 vg/cell分別感染293T細胞和HeLa細胞,3天后進行流式細胞術分析。分析確認,使用本制品純化的AAV依然保持其感染能力。
 
 
 
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