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機構用戶解決方案

產品選擇指南

技術服務信息

SARS-CoV-2假病毒包裝系統
品牌 Code No. 產品名稱 包裝量 價格(元) 說明書 數量
Clontech 632668 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length) 12 Rxns ¥12,496
Clontech 632669 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length) 12 Rxns ¥12,496
Clontech 631292 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length) 12 Rxns ¥12,710
Clontech 632670 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated) 12 Rxns ¥12,496
Clontech 632671 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated) 12 Rxns ¥12,496
Clontech 631293 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated) 12 Rxns ¥12,710
Clontech 631295 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal) 16 Rxns ¥13,404
Clontech 632672 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) 12 Rxns ¥10,004
Clontech 632673 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) 12 Rxns ¥10,004
Clontech 631290 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) 12 Rxns ¥10,219
Clontech 632674 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) 12 Rxns ¥10,004
Clontech 632675 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) 12 Rxns ¥10,004
Clontech 631291 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) 12 Rxns ¥10,219
Clontech 632676 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) 6 Rxns ¥4,844
無標題文檔
 
開發COVID-19療法的一個共同目標就是要證明對SARS-CoV-2病毒的感染具有抑制作用?;诎踩胧┛紤],目前研究人員大多使用帶有SARS-CoV-2刺突蛋白(spike protein)的假病毒(Ni et al. 2020, Shang et al. 2020)替代SARS-CoV-2活病毒開展研究。我們對Lenti-X包裝系統進行了優化,這樣可以很方便地制備高滴度的spike-假慢病毒,為這些研究工作提供支持。
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots是一種假型慢病毒包裝系統,用于簡便制備具有SARS-CoV-2刺突蛋白作為包膜蛋白的假型慢病毒,有兩種類型產品可供選擇。
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)使您能夠輕松靈活地制備任何所需要的SARS-CoV-2刺突蛋白變體的高滴度假型慢病毒。只需將任意所需的SARS-CoV-2刺突蛋白變體序列克隆到所提供的表達載體中,用滅菌水稀釋所選擇的表達載體,然后將混合物添加到試劑盒中提供的單次反應管中。然后,將重組后的轉染混合物添加至10 cm培養皿培養的包裝細胞中。為方便使用,我們提供分別編碼截短的SARS-CoV-2刺突蛋白變體D614G、B.1.1.7和B.1.351的三個質粒。使用提供的刺突蛋白變體序列作為模板和pEmpty載體,通過簡便的一步In-Fusion Snap Assembly反應可以輕松構建所需要的SARS-CoV-2刺突蛋白變體。
 
其它Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots試劑盒包括:含有Xfect轉染試劑和慢病毒包裝質粒的凍干混合物,慢病毒包裝質粒攜帶四種不同刺突蛋白變體中的其中一種;表達綠色熒光蛋白質ZsGreen1和熒光素酶報告基因的轉移載體;制備缺少包膜蛋白慢病毒粒子的轉染混合物(通常用作陰性對照)。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots試劑盒,通過簡便的一步法即可獲得高滴度SARS-CoV-2假病毒:只需將含有您選擇的轉移載體的水溶液添加至單管中,然后使用重組后的轉染混合物轉染培養在10厘米培養皿中的包裝細胞Lenti-X 293T Cell Line(Code No. 632180)。轉染后48–72小時收集病毒上清液。
 
有多種包裝系統可供選擇,可制備帶有6種不同SARS-CoV-2刺突蛋白變體的病毒粒子:

· WT Spike, Full Length—野生型(全長),來源于新型冠狀病毒SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1分離株 (NC_045512.2) , 我們對密碼子進行了優化,可以在哺乳動物細胞中表達
· D614G Spike, Full length—D614G變異型(全長),刺突蛋白編碼序列包含D614G突變; 自COVID-19爆發以來,這種變異型的流行性迅速上升 (Isabel et al. 2020)
· B.1.351 Spike,Full Length—B.1.351變異型(全長),最初在南非確定的變異株,WHO劃分為β型。
· WT Spike, Truncated—野生型(Truncated)
· D614G Spike,Truncated—D614G變異型(Truncated)
· B.1.351 Spike,Truncated—B.1.351變異型(Truncated)
截短的野生型和D614G、B.1.351變異型刺突蛋白編碼序列,去除了C-端19個氨基酸。這種截短處理,提高了所制備病毒粒子上刺突蛋白的豐度,提高了病毒粒子的感染性 (Johnson et al. 2020)。

為方便起見,Lenti-X SARS-CoV-2 packaging mixes也可以單獨購買。
也可以提供需要配套使用的宿主細胞Human ACE2 293T Cell Line(Code No.631289)。

 
■ 概述
· 高性能包裝系統有助于始終獲得高病毒滴度:避免在試劑優化上花費時間,讓您可以專注于下游分析
· 便捷的單管形式可大大減少動手時間和出錯的可能性:操作簡便,只需要將含有所選擇轉移質粒的水溶液,添加至包裝細胞培養液中即可
· 包裝混合物可以單獨購買,也可以打包購買:節約資源,按需購買
· 提供中和試驗對照:可使用試劑盒中的包裝混合物,制備缺少包膜蛋白的慢病毒粒子,用作陰性對照
· 提供配套宿主細胞ACE2 cell line
 
 
■ 實驗例
圖1. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備假病毒操作流程。
 
圖2. Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)操作流程。
 
圖3. 使用SARS-CoV-2假病毒轉導ACE2-陽性細胞。Panel A. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備表達WT (Wuhan-Hu-1) 或者D614G變體刺突蛋白,同時也表達ZsGreen1綠色熒光蛋白質的假慢病毒粒子。每種病毒制劑取100 μl,轉導穩定表達人ACE2受體的HEK293T細胞,HEK293T細胞培養在含有6 μg/ml polybrene 的48孔板中。轉導后6天通過流式細胞術測定每個樣品的轉導效率。Panel B. 使用表達螢火蟲熒光素酶的假病毒分別轉導ACE2-陽性和不表達ACE2的HEK293T細胞(用于提供熒光素酶活性分析背景信號)。轉導后6天測定熒光素酶活性。
 
圖4. 測定使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots獲得的功能滴度。Panel A.使用SARS-CoV-2假病毒轉導ACE2-陽性HEK293T細胞,通過分析ZsGreen1熒光標記的表達情況測定功能滴度。Panel B. 感染后72小時,ACE2-陽性細胞的顯微圖像。
 
 
圖5. 可溶性ACE2蛋白對攜帶SARS-CoV-2刺突蛋白變體假病毒的中和活性。Panels A and B. 梯度稀釋融合IgG Fc結構域的可溶性ACE2蛋白(ACE2-Fc),與SARS-CoV-2假病毒作用于ACE2 HEK293T細胞。感染后3天檢測熒光素酶表達水平,作為病毒感染性讀數。數據以相對于僅病毒對照感染的中和作用百分比表示。數值為平均值±標準差,每個實驗重復三次。
 
圖6. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備D614G和B.1.351變異型SARS-CoV-2假病毒,測定其轉導效率和感染滴度。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots(B.1.351或D614G,全長或截短)制備表達ZsGreen1綠色熒光蛋白質的SARS-CoV-2假病毒。按照標準操作指導,使用Lenti-X Concentrator將病毒液濃縮50倍(B.1.351全長)或20倍(B.1.351截短和D614G),取不同體積病毒液轉導HEK293T細胞,此細胞在48孔板中培養,含有6 μg/ml聚凝胺,能穩定表達人ACE2受體。在轉導后6天通過流式細胞儀測定每個樣品的轉導效率(Panel A),并計算功能滴度(Panel B)。
 
圖7. 使用Lenti-X Packaging Single Shots (Universal)制備的SARS-CoV-2假病毒轉導ACE2-陽性細胞。使用Lenti-X Packaging Single Shots (Universal)制備表達截短的B.1.1.7 SARS-CoV-2刺突蛋白,同時也表達ZsGreen1綠色熒光蛋白質(Panel A)或者螢火蟲熒光素酶(Panel B)的假型慢病毒粒子。Panel A. 使用濃縮后的病毒上清液(20X; 30 or 10 μl)轉導穩定表達人ACE2受體的HEK293T細胞,HEK293T細胞培養在48孔板中,polybrene含量為6 μg/ml。轉導后6天通過流式細胞術測定每個樣品的轉導效率。Panel B. 使用濃縮后的病毒上清液(20X; 30, 20, or 10 μl)分別轉導穩定表達人ACE2受體的HEK293T細胞,HEK293T細胞培養在48孔板中,polybrene含量為6 μg/ml。轉導缺少ACE2轉基因的HEK293T細胞,以測定背景發光水平(NC,陰性對照)。轉導后6天測定每個樣品的發光值。
 
圖8. 表達螢火蟲熒光素酶的B.1.351 SARS-CoV-2假病毒轉導ACE2 HEK293T細胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 spike, 全長或截短)制備表達螢火蟲熒光素酶的假病毒。按照標準操作指導,使用Lenti-X Concentrator將病毒液濃縮20倍,取不同體積病毒液轉導HEK293T細胞,此細胞在48孔板中培養,含有6 μg/ml聚凝胺,能穩定表達人ACE2受體。同時平行轉導不表達ACE2受體的HEK293T細胞以確定背景發光水平,因為在缺乏ACE2受體的情況下,SARS-CoV-2假病毒無法感染HEK293T細胞。在轉導3天后測定每個樣品的發光值。
 
■ 制品內容
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length)(Code No. 632668)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) (Code No. 632672)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix(No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set*1*2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length)(Code No. 632669)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) (Code No. 632673)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set*1*2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length)(Code No. 631292)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (Code No. 631290)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set*1*2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated)(Code No. 632670)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) (Code No. 632674)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set*1*2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated)(Code No. 632671)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) (Code No. 632675)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set*1*2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated)(Code No. 631293)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (Code No. 631291)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set*1*2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)(Code No. 631295)3
·Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)*1
·pEmpty Vector*1(500 ng/μl) 20 μl
·Lenti-X Reporter Vector Set*1 *2
·Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set*1
  pSpike D614G Truncated Vector(500 ng/μl) 20 μl
  pSpike B.1.1.7 Truncated Vector(500 ng/μl) 20 μl
  pSpike B.1.351 Truncated Vector(500 ng/μl) 20 μl
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) (Code No. 632672)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) (Code No. 632673)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (Code No. 631290)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) (Code No. 632674)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) (Code No. 632675)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (Code No. 631291)
  各12管(冷凍干燥品)
  ※1管用于1個10 cm培養皿病毒包裝使用
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
  6管(冷凍干燥品)
  ※1管用于1個10 cm培養皿病毒包裝使用
 
*1 不單獨銷售。
*2 Lenti-X Reporter Vector Set
  pEmpty Vector*1(500 ng/μl) 20 μl
  pLVXS-Luciferase-Puro Vector(500 ng/μl) 20 μl
  不單獨銷售。請使用大腸桿菌擴增以獲得充足數量的質粒。
3 我們還提供不包含Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set的產品。在不需要Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set的場合下,請選擇Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)(Code No. 631294)。
 
■ 保存
-20℃
(各Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix保存在裝有干燥劑的箔袋內)
 
參考文獻
1. Detection of SARS-CoV-2-Specific Humoral and Cellular Immunity in COVID-19 Convalescent Individuals. Ni, L. et alImmunity. (2020) 52, 971–977.
2. Cell entry mechanisms of SARS-CoV-2. Shang, J. et alProc Natl Acad Sci USA. (2020) 117, 11727–11734.
3. Evolutionary and structural analyses of SARS-CoV-2 D614G spike protein mutation now documented worldwide. Isabel, S. et alSci Rep. (2020) 10, 14031.
4. Optimized Pseudotyping Conditions for the SARS-COV-2 Spike Glycoprotein. Johnson, MC. et alJ Virol. (2020) 94, e01062-20.
 
 
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