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機構用戶解決方案

產品選擇指南

技術服務信息

高滴度慢病毒包裝系統
品牌 Code No. 產品名稱 包裝量 價格(元) 說明書 數量
Clontech 631275 Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 16 Rxns ¥11,501
Clontech 631276 Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 96 Rxns ¥26,205
Clontech 631277 Lenti-X Packaging Single Shots (Integrase Deficient) 16 Rxns ¥10,926
Clontech 631278 Lenti-X Packaging Single Shots (Ecotropic) 16 Rxns ¥10,926
Clontech 631282 Lenti-X Packaging Single Shots (96-well, VSV-G) 4 × 96-well plates ¥12,228
Clontech 631294 Lenti-X™ Packaging Single Shots (Envelope-Free) 16 Rxns ¥11,323
無標題文檔
 
 
慢病毒包裝系統 293T包裝細胞 慢病毒滴度測定 慢病毒濃縮 慢病毒純化 轉導增強 整合位點檢測
 
 
高滴度慢病毒包裝系統
Lenti-X Packaging Single Shots是第四代慢病毒包裝系統,它通過非常簡便、操作一致的一步法來制備高滴度慢病毒。通常情況下,VSV-G型慢病毒滴度可達到107-108 IFU/ml。Lenti-X Packaging Single Shots由單管形式的Xfect Transfection Reagent和經過配比優化的Lenti-X包裝質粒組成,兩者預混后經過預分裝和凍干處理,所以無需額外的轉染試劑。只需要將這種混合物與您選擇的慢病毒載體在無菌水中重新配制,然后將其添加到10厘米培養皿或者96孔培養板培養的293T細胞中,例如Lenti-X 293T Cells(Code No. 632180)即可制備高滴度病毒。
 
我們提供以下四種類型的Lenti-X Packaging Single Shots,這些包裝系統針對不同的嗜性和整合特征進行了優化。每管中試劑和載體的量,都是以在10厘米培養皿或者96孔培養板中制備慢病毒來進行優化的。轉染過程完全可以在血清存在的情況下進行,使用不含四環素的FBS,對于使用該技術獲得高病毒滴度是很關鍵的。

· Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)Lenti-X Packaging Single Shots (96-well, VSV-G) 在四種類型系統中提供最高的病毒滴度(107-108 IFU/ml),具有最廣泛的病毒嗜性,分別以單管和96孔的形式提供。
· Lenti-X Packaging Single Shots (Ecotropic)病毒嗜性限于小鼠和大鼠來源細胞
· Lenti-X Packaging Single Shots (Integrase Deficient)制備整合能力顯著降低的VSV-G假型慢病毒
· Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free) 可靈活制備帶有所選包膜蛋白的假型慢病毒。

 
■ 應用
· 慢病毒可以轉導廣泛的難轉染細胞類型
· 輕松構建穩轉細胞系
· 制備VSV-G假型,單嗜型或整合酶缺陷型慢病毒
 
■ 觀看視頻
了解我們的第四代包裝系統如何可以產生如此高的病毒滴度。
 
了解使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 如何輕松始終如一地獲得高滴度慢病毒。
 

■ 實驗例

 
圖1. Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 操作流程。
 
圖2. Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)操作流程。
 
圖3. 高效一致的轉染可制備出高滴度病毒。在四個獨立實驗中,按照Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 操作流程包裝含有ZsGreen1基因的慢病毒載體。簡而言之,在四個Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 中,每一個都添加7 μg pLVX-ZsGreen1質粒;每管渦旋振蕩20秒并在室溫下孵育10分鐘。然后,將混合物添加至匯合度約為80%的培養Lenti-X 293T cells中。轉染后48小時,通過熒光顯微鏡(Panel A,頂部)和光學顯微鏡(Panel A,底部)拍攝圖像。拍攝圖像后,收集培養上清液,感染HT1080細胞并進行滴度測定(Panel B,IFU/ml)。
 
圖4. 無論是哪種慢病毒載體骨架,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 都可以制備出高滴度病毒。將CMV ZsGreen1表達框克隆到多個慢病毒載體骨架中,然后按照操作指導使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 將這些載體包裝成為慢病毒。在四個Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 中,每一個都添加7 μg pLVX-ZsGreen1質粒;每管渦旋振蕩20秒并在室溫下孵育10分鐘。然后,將混合物添加至匯合度約為80%的培養Lenti-X 293T cells中。轉染后48小時,通過多種方法測定病毒滴度。為了確定感染性,收集上清液并感染HT1080細胞(流式細胞術)。收集的病毒上清液也通過RT-PCR方法定量病毒基因組拷貝數(qRT-PCR,Lenti-X qRT-PCR Titration Kit),ELISA方法測定p24(p24 ELISA,Lenti-X p24 Rapid Titer Kit),或者通過一種快速檢測方法(Lenti-X GoStix)測定滴度。
 
圖5. 第四代和第三代慢病毒包裝系統比較。我們的Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 使用的是5個獨立組件組成的包裝系統(Panel A),這5個組件按照特別比例混合,優化了病毒包裝性能。gag,polenv基因的分離有效地降低了RCL產生的概率(Wu et al., 2000)。Tet-Off和Tat反式激活因子驅動病毒必需成分高水平表達,誘導級聯表達反應,從而可以制備出高滴度慢病毒。pol基因與vpr 基因的融合可以確保反轉錄酶/整合酶蛋白質能夠轉運到重組慢病毒顆粒中。本示意圖沒有顯示所有的載體元件。而第三代慢病毒包裝系統(Panel B)不包含分離的gagpol序列,也沒有使用反式激活級聯機制,所以產生的病毒滴度較低。
 
 
 
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