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產品選擇指南

技術服務信息

T7 RNA Polymerase ver.2.0
品牌 Code No. 產品名稱 包裝量 價格(元) 說明書 數量
Takara 2541A T7 RNA Polymerase ver.2.0 20,000 U ¥2,600
無標題文檔
 
■ 制品內容(Code No. 2541A)
T7 RNA Polymerase ver.2.0 (200 U/μl) 20,000 U
10X T7 RNA Polymerase Buffer 1 ml
 
■ 制品說明
本制品以含有T7啟動子序列的雙鏈DNA為模板,以NTPs為底物,轉錄啟動子下游區域,合成與模板互補的單鏈RNA。與附帶的buffer一起用于體外轉錄 (IVT) 反應時,可以大量制備高質量的RNA。
本制品是T7 RNA Polymerase(Code No. 2540A/B)的升級產品,每個反應(20 μl體系)的RNA合成量提高約7倍(圖1),性能更強!
圖 1. 本制品與舊產品合成 FLuc RNA(約 1.9 kb)時的產量比較(20 μl 體系)
 
* 典型的 T7 啟動子序列和轉錄起點
為 IVT 反應制備模板 DNA 的典型 T7 啟動子序列如下所示。將轉錄起始點(+1 位置)的堿基設置為“G”對于高效的 RNA 合成很重要,但需要根據要合成的RNA序列和用于5′-cap修飾的Cap類似物的特點來設計模板,所以要根據目的準備模板DNA。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 起源
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase.
 
■ 性質
1. 分子量:約99 kDa
2. 輔因子:Mg2+
 
■ 活性定義
在 37℃,1 小時內使 1 nmol [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位(unit)。
 
■ 用途
1. 使用 Cap 類似物合成帶帽的 mRNA
2. 長鏈非編碼 RNA 的合成
3. guide RNA 的合成
4. siRNA前體的合成
5. 用于 RT-qPCR 的 RNA 標準模板的合成
6. 高標記RNA 探針的合成
 
■ 使用注意
1. 酶不要劇烈攪拌。
2. 當 dsDNA 模板、試劑、試管或微量移液器吸頭被 RNase 污染時,合成的 RNA 的產量會降低或者出現片段化。在實驗過程中應采取預防措施以避免 RNase 污染,例如戴一次性手套和使用專門用于 RNA 實驗的試管和微量移液器吸頭。
3. 為了合成長度一致的RNA,通常使用線性dsDNA(例如線性化質粒和 PCR 產物)用于體外轉錄。有報道稱,模板DNA末端應為5’-突出或平端,以避免出現非特異性產物。
4. 緩沖液中的亞精胺會與核酸形成復合物并可能產生沉淀,因此模板 DNA 應在加酶之前即倒數第二步再加入反應體系中。
 
■ 使用例
 
37℃孵育 1-2 小時。
 
 
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