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第三方評測: 新冠病毒檢測,Takara qPCR試劑表現出色

 
bioRxiv is receiving many new papers on coronavirus SARS-CoV-2.   A reminder: these are preliminary reports that have not been peer-reviewed. They should not be regarded as conclusive, guide clinical practice/health-related behavior, or be reported in news media as established information.
 
新冠肺炎疫情在全球快速蔓延,準確地對新冠病毒進行檢出至關重要。盡管抗體檢測可以快速、簡便地得到結果,但通過qPCR方法進行核酸檢測,仍然是判斷疑似病例或患者是否攜帶病毒、是否具有傳染性的“金標準”??v觀全球眾多qPCR試劑供應商,Takara產品多年來一直以高質量、高穩定性著稱,在疫情下的緊急時刻,英國科學家以第三方的角度,對多個行業內知名品牌的qPCR產品進行了測評。
 
2020年4月17日,英國科學家在bioRxiv預印本平臺發表文獻——Comparison of SARS-CoV2 N gene real-time RT-PCR targets and commercially available mastermixes。作者比較了四種主流的RT-qPCR試劑,使用新冠病毒N基因RNA轉錄本作為模板測定各試劑的靈敏度,并通過74個鼻咽拭子樣本進行驗證。
 
結果顯示:N2基因顯示了最佳的敏感度;四種一步法RT-qPCR試劑中的三種表現良好;在最低檢出界限方面,Takara One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix(Code No. RR600)表現最為出色。
 
■ 實驗方法
作者構建了新冠病毒N基因的RNA轉錄本,吸光度測定后10倍稀釋至1– 100,000 copies/μl。提取了74個疑似感染者的鼻/咽拭子樣本的總RNA,并在提取過程中加入了犬瘟病毒(PDV)細胞培養物作為陽性內參照。根據各產品說明書配置了25 μl反應體系,加入7.5 μl RNA模板,設置陽性和陰性對照,按照快速反應程序設置儀器反應條件。
 
■ 實驗結果
1. N基因轉錄本作為模板,檢測三對引物、探針的靈敏度
使用文獻上和CDC 2020公布的三對不同N基因引物、探針進行檢測。其中CDC 2020的N2位點引物/探針,在模板只有1 copy/μl的情況下,四種試劑中三種均可以檢出。
2. N基因轉錄本作為模板,檢測四種試劑的靈敏度
四種測評試劑中,Takara在三組檢測結果中,靈敏度均可以達到1 copy/μl。而其他知名品牌的產品靈敏度在1-100 copies/μl之間。
3. 74個鼻/咽拭子提取核酸作為模板,Takara vs Q公司試劑
74個疑似感染者的樣本,使用兩種試劑進行檢測后,67個樣本的結論是一致的,包括29個陽性和38個陰性。另外7個樣本,Takara試劑實驗判定為陽性,但Q公司試劑實驗判定為陰性。
另外,Takara試劑的擴增曲線熒光信號背景值遠低于Q公司產品。
 
■ 文章結論
在新冠病毒檢測方面,無論是構建的病毒模板,還是實際患者樣本作為模板, Takara公司One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix(Code No. RR600)與同樣世界知名的試劑供應商產品相比,都表現出了更好的靈敏度、更低的熒光信號背景。
文獻中產品RR600 One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix,2019年上市,是Takara先進的研發技術的展示,是完全預混型的探針法One Step RT-qPCR試劑,操作簡單,并具有卓越的抗反應阻礙物能力,我們還可以提供帶有UNG版本的產品RR601,防止假陽性產生。
Takara探針法One Step RT-qPCR家族,以不同特長滿足客戶的不同需求。
Takara也可以根據客戶的習慣提供更靈活的散裝試劑,以現有的產品目錄為基礎,修改配方、包裝量、包裝規格或提供大體積的散裝試劑,當然,也可以提供形成文件的質量保證書等材料。
Takara致力于為全球科學家提供高質量、高穩定性的產品,在對抗新冠病毒的戰斗中,我們做了充分的準備:貨源充足,保證貨期,保持穩定價格。
 
 
 
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